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两种奶牛真皮成纤维细胞分离培养方法的比较

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为了比较两种体外分离和培养奶牛真皮成纤维细胞方法,采集奶牛蹄部真皮组织,通过组织块贴壁法和双酶消化法(胰蛋白酶-Ⅰ型胶原酶)分离原代奶牛真皮成纤维细胞,通过传代培养进一步纯化并扩增.利用显微镜观察细胞形态及生长特性,MTT法用于绘制细胞生长曲线,利用细胞免疫荧光技术检测其表面标志物,鉴定细胞纯度.倒置显微镜下观察,贴壁后第 6天有细胞爬出,形态多呈长梭形,排列紧密呈漩涡状或束状;双酶消化组第 2 天有长梭形细胞生长,混杂少量上皮细胞生长.生长曲线图表示,组织块贴壁组细胞生长速度较快.免疫化学荧光检测第四代奶牛真皮成纤维细胞,波形蛋白呈阳性表达,角蛋白-18呈阴性表达,表示细胞纯度较高.两种方法均能分离出奶牛真皮成纤维细胞,与双酶消化法相比,组织块贴壁法分离的细胞纯度更高,活性更佳,增殖周期更短,提示组织块贴壁法是分离培养奶牛真皮成纤维细胞的首选方法.
Comparison of two Methods for Isolation and Culture of Bovine Dermal Fibroblasts

鲁文赓、袁思琦、司琳清、田春雨、谢何昕、周继伟、金吉东

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黑龙江八一农垦大学动物科技学院,大庆 163319

吉林省榆树市农业综合行政执法大队

科菲特饲料(长春)有限公司

奶牛 蹄叶炎 真皮成纤维细胞 组织块贴壁法 双酶消化法

黑龙江省自然科学基金联合引导项目现代农业(奶牛)产业技术体系建设专项

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2023

10.3969/j.issn.1002-2090.2023.01.007

黑龙江八一农垦大学学报
黑龙江八一农垦大学

黑龙江八一农垦大学学报

影响因子：0.888
ISSN：1002-2090
年,卷(期)：2023.35(1)
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