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DuCV和GPV与DEV三重PCR检测方法的建立及应用

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根据GenBank中的序列,合成针对鸭圆环病毒(DuCV)REP基因、鹅细小病毒(GPV)NS1基因、鸭肠炎病毒(DEV)UL6基因的3对特异性引物,以病毒的克隆质粒作为模板,进行退火温度、引物终浓度的优化,建立一种能同时鉴别DuCV、GPV、DEV的三重PCR检测方法,并检验该方法的特异性、敏感性和重复性.结果显示:试验所建立的三重PCR检测方法的最适退火温度为58.5℃,引物DuCV REP、GPV NS1、DEV UL6的最适终浓度分别为0.9、0.6、0.7μmol/L;该方法能够同时扩增出DuCV、GPV和DEV的特异性片段,而不能扩增出NDV、RA、AIV、DHV和TUMV,表明该方法特异性强;该方法对质粒DuCV、GPV和DEV模板的最低检测量分别为1、100、10 fg,表明该方法敏感性好;运用该方法对DuCV+GPV+DEV、DuCV+GPV、GPV+DEV、DuCV+DEV、DuCV、GPV、DEV进行检测,均能扩增出与预期一致的特异性片段,表明该方法重复性好;运用该方法对42份临床样本进行检测,其检出率分别为26.19％、30.95％和19.05％,与单一PCR的检出结果一致,表明该方法能适用于临床样本的检测.试验建立的方法具有快速、简便、特异性强、敏感性好、重复性好等特点,可用于DuCV、GPV和DEV临床样本混合感染的快速诊断及鉴别诊断.
Establishment and application of triple PCR method for duck circovirus, goose parvovirus and duck plague virus

田琴、张明华、周碧君、程振涛、王开功、文明

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贵州大学动物科学学院,贵州 贵阳 550025

贵州省动物疫病研究室,贵州 贵阳 550025

贵州省动物生物制品工程技术研究中心,贵州 贵阳 550025

鸭圆环病毒(DuCV) 鹅细小病毒(GPV) 鸭肠炎病毒(DEV) 三重PCR 退火温度 引物终浓度

国家自然科学基金贵州省百层次创新型人才项目贵州省科技平台及人才团队计划贵州省生态家禽产业技术体系功能实验室项目三穗鸭工程技术研究中心建设项目贵州省研究生教育创新计划

31560703黔科合人才[2016]4009号黔科合平台人才[2018]5253号黔农体系[2017]03号黔科合平台人才[2019]5203号GZZ2017002

2021

10.13331/j.cnki.jhau.2021.02.016

湖南农业大学学报(自然科学版)
湖南农业大学

湖南农业大学学报(自然科学版)

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.868
ISSN：1007-1032
年,卷(期)：2021.47(2)
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