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利用CRISPR/Cas9技术构建猪的LDLR基因敲除细胞

Generation of LDLR-knockout pig cells using by CRISPR/Cas9 technology

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利用CRISPR/Cas9系统构建猪的低密度脂蛋白受体基因LDLR敲除细胞:根据 NCBI数据库猪LDLR基因(Gene ID为 396801)序列设计sgRNA靶位点,构建敲除打靶载体,通过电转染猪胎儿成纤维细胞,经G418筛选获得细胞克隆,进行 PCR 扩增和 T 载体克隆测序,经序列比对计算基因敲除效率.结果表明,依照CRISPR/Cas9系统GN20GG法则,在LDLR基因第一外显子上设计 1条sgRNA,测序结果显示靶序列已正确连接,转染、筛选后共获得 30个单细胞克隆,23个测序成功,其中有 7个细胞克隆为LDLR基因敲除细胞克隆,敲除效率为 30.4%.

pigLDLR genegene knockoutCRISPR/Cas9 system

韩佃刚、胡娟、董俊、周思佳、陈朝林、张家翔、信吉阁

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云南农业大学动物科学技术学院,云南 昆明 650201

昆明海关技术中心,云南 昆明 650200

云南农业大学动物医学院,云南 昆明 650201

猪 低密度脂蛋白受体基因 基因敲除 CRISPR/Cas9系统

国家自然科学基金国家自然科学基金云南省科技计划

31960658313605322013FB041

2023

10.13331/j.cnki.jhau.2023.04.014

湖南农业大学学报(自然科学版)
湖南农业大学

湖南农业大学学报(自然科学版)

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.868
ISSN：1007-1032
年,卷(期)：2023.49(4)
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