摘要
目的 构建蛋白磷酸酶LY1基因的原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达.方法 PCR扩增LY1的CDs基因片段,并将其克隆人原核表达载体pET28a(+)中构建重组质粒pET28a(+)-LY1.经限制性内切酶Nhe Ⅰ、XhoⅠ双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白.SDS-PAGE、Western blot方法检测重组蛋白的表达.结果 获得全长为1 179 bp的LY1基因片段,以构建的重组质粒pET28a(+)-LY1转化E.coliBL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出分子量约为42 kD的重组蛋白.SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coli BL21(DE3)的胞质中.Western blot方法检测出LY1融合蛋白的表达.结论 成功构建了原核表达载体pET28a(+)-LY1,并表达出重组LY1蛋白,为进一步单克隆抗体的制备和生物信号转导的相关研究奠定了实验基础.
基金项目
国家自然科学基金(30572206)
安徽省自然科学基金(00044202)
安徽省自然科学基金(01043709)
安徽省教育厅自然科学基金(2005kj333zc)
安徽省人才基金(2002Z035)
NETL
NSTL
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