奶山羊乳铁蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中文摘要：为了制备奶山羊乳铁蛋白的多克隆抗体,为进一步的试验提供材料,该研究运用软件分析并选取最适合原核表达的LF序列进行扩增,将扩增出的序列与pET-32a(+)质粒连接,形成原核表达质粒pET-32a-LF,将质粒转化入大肠杆菌,在最适条件(37℃、0.5 mmol/L IPTG、4 h)下诱导表达出大量蛋白.通过Ni-NTA Resin法将蛋白纯化后皮下注射4月龄新西兰大耳兔,免疫注射结束后采集抗体血清,并用间接酶联免疫吸附法和免疫印迹法检测多抗的效价及特异性.结果显示克隆得到适合原核表达的279 bp的LF CDS片段,pET-32a(+)-LF原核表达载体成功构建并顺利表达(未形成包涵体),表达的截短蛋白大小为10 kD.抗体效价达到1:107;免疫印迹试验结果显示,原核表达的LF蛋白和山羊乳腺上皮细胞中的LF蛋白能够被该抗体特异性识别.

外文标题：Prokarytic Expression and Preparation of Polyclonal Antibody for Lactoferrin (LF)of Dairy Goat

作者：

钟玉玲、代邦国、杜伟伟、张华文、李纯、史怀平

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作者单位：

西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌 712100

关键词：

奶山羊乳铁蛋白(LF) 抗体制备

基金：

陕西省创新能力支撑计划西安市科技计划陕西省农业科技创新驱动项目

项目编号：

2021TD-3120NYYF0030NYKJ-2021-YLXN09

出版年：

2022

DOI：

10.3969/j.issn.1673-1182.2022.02.003

家畜生态学报

西北农林科技大学

家畜生态学报

CSTPCD北大核心

影响因子：0.635

ISSN：1673-1182

年,卷(期)：2022.43(2)

参考文献量4