摘要
目的:研究载EPO壳聚糖温敏水凝胶促进骨髓间充质细胞成骨分化的作用.方法:通过离子交联法合成壳聚糖温敏水凝胶,促进壳聚糖和甘油磷酸钠的交联,检测凝胶形成时间;通过Elisa等分子生物学方法检测EPO-CS/GP/GA载药量及药物缓释规律;通过MTT实验观察不同时间点的EPO-CS/GP/GA缓释液对BMSCs增殖的影响.通过Real-timg PCR检测成骨基因RUNX2、ALP、COL-1和SP-7表达的变化,明确EPO-CS/GP/GA对BMSCs分化和功能的作用.结果:当pH值为6.5和7.0时,凝胶时间分别为(135±15)s和(110±15)s.2 h内EPO的缓释率约为40％,4 d后EPO缓释率约为80％以上,2周内累计释放率保持在95％左右.EPO-CS/GP/GA对BMSCs的增殖具有明显的促进作用,第1天、第2天、第4天、第10天、第15天各组的细胞增殖率在120％以上;第3天时,EPO-CS/GP/GA组成骨相关基因的表达与空白对照组相比,BMSCs中RUNX2和COL I的表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);SP7的表达高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);第7天时,实验组RUNX2、COLI和SP7的表达均有显著提高,差异有统计学意义(P<0.01),ALP的表达也高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);第14天时,实验组RUNX2、COLI、ALP和SP7的表达均显著升高,差异有统计学意义(P<0.01).结论:载EPO壳聚糖温敏水凝胶具有促进骨髓间充质细胞成骨分化的作用.
基金项目
福建省卫生计生科研人才培养项目(2018-2-74)
厦门市医疗卫生指导性项目(3502Z20209237)
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