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重组NDV HN基因乳酸菌穿梭表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

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为构建新城疫病毒乳酸菌穿梭表达载体,采用RT-PCR方法从新城疫病毒中扩增了HN基因,将其克隆到pMD18-T Simple Vector中.经测序鉴定正确后,定向克隆至乳酸菌表达载体pW425et中,并转化入表达宿主菌BL21 (DE3),利用IPTG诱导表达.采用SDS-PAGE和Western blotting检测重组菌在大肠杆菌中的表达情况.结果表明:NDVHN基因与表达载体pW425et正确重组,且该重组菌传50代次以上,重组质粒依然稳定.SDS-PAGE显示表达出约63 kD的条带,与已知表达的HN蛋白大小相符.Western blotting进一步证实该蛋白能被NDV阳性抗体所识别,具有反应原性.表明构建了重组NDVHN基因乳酸菌穿梭表达载体.
Construction of Recombinant Newcastle Disease Virus HN Lactobacillus Shuttle Expression Vector and Expression in Escherichia coli
To express a recombinant Newcastle disease virus Lactobacillus expression vector, HN gene was amplified by RT - PCR from DNV and cloned into pMD18-T Simple Vector. After receiving the right sequence, the particle was further recombined with Lactobacillus expression vector and then transformed into E. coli BL21 (DE3) . The result showed that NDV HN gene was correctly cloned into Lactobacillus expression vector and the recombinant strain could be obtained for at least 50 generations. SDS - PAGE and Western blotting results displayed that NDV HN had reactionogenicity with NDV positive antibody, indicating that recombinant NDV HN Lactobacillus expression vector was constructed.

NDVhemagglutinin-neuraminidaseLactobacillus expression vectorEscherichia coli

郭衍冰、胡静涛、于丹、曹岩峰、王一鸣、张旺、王春凤

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长春市动物疾病预防控制中心,长春130000

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新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶 乳酸菌穿梭表达载体 大肠杆菌

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2011011122011492011AA10A20920110061110005

2013

吉林农业大学学报
吉林农业大学

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CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.014
ISSN：1000-5684
年,卷(期)：2013.35(2)
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