摘要
目的 本研究探讨锌指蛋白转录因子 10(KLF10)在微动对成骨细胞的作用及其机制.方法 利用小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1 细胞,经静态或机械力作用培养,通过QPCR和Western blotting检测细胞KLF10 的mRNA的表达及蛋白水平;为了建立稳转敲低KLF10 细胞系,将对照组及两个KLF10 敲低组转入MC3T3-E1 细胞内,应用Western blotting检测敲低效率;分成静态培养组、KLF10 敲低静态组、机械力组、机械力+KLF10 敲低组,通过CCK8、流式细胞仪检测各组细胞增殖和凋亡情况;Western blotting检测各组细胞内骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)及Runt相关转录因子 2(Runx-2)蛋白表达情况.结果 与静态培养相比,在机械力作用下,MC3T3-E1 细胞中KLF10 mRNA 和蛋白表达升高(P<0.05);与对照组相比,两个敲低组(siRNA KLF10-1,siRNA KLF10-2)KLF10 的蛋白表达降低,其中一个 siRNA KLF10-2 效果明显(P<0.01);与静态组比较,siRNA KLF10-2 静态培养组细胞的增殖水平非常显著降低(P<0.001);机械力组细胞的增殖水平升高(P<0.05);机械力+siRNA KLF10-2 组细胞的增殖水平显著降低(P<0.01);与静态组比较,siRNA KLF10-2 静态培养细胞的凋亡非常显著增多(P<0.001);机械力组细胞的凋亡降低(P<0.05);机械力+siRNA KLF10-2 组细胞的凋亡显著增多(P<0.01);与静态组比较,siRNA KLF10-2 静态培养组细胞的OPN、OCN、RUNX-2 的蛋白表达非常显著降低(P<0.001);机械力组细胞的OPN、OCN、RUNX-2 的蛋白表达升高(P<0.05);机械力+siRNA KLF10-2 组细胞的OPN、OCN、RUNX-2 的蛋白表达降低(P<0.01).结论 KLF10 在微动促进成骨细胞增殖、分化的过程中起着重要作用.
基金项目
江西省卫生健康委科技计划(202130005)
江西省科技厅自然基金面上基金(20212BAB206059)
国家自然基金课题(82160528)
江西省中医药科技计划一般项目(2023B0027)
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