目的:通过寒冷致小鼠上呼吸道黏膜免疫功能低下(upper airway immunity dysfunction,UAID)模型的实验,基于免疫球蛋白A单克隆抗体(immunoglobulin A monoclonal antibody,IgA MAb)阻断新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的Spike-ACE 2相互作用探究RMK-03TM喷剂对上呼吸道黏膜的免疫调节机制.方法:将40只SPF级ICR小鼠分为正常组、UAID模型组、利巴韦林喷雾剂组、RMK-03TM喷雾剂组4组,每组10只;利巴韦林喷剂组和RMK-03TM喷剂组先给予口腔喷雾0.1 mL/只q12h,给药3 d,;第3 d,除正常组外其他各组小鼠复制UAID模型,即将小鼠放入-20℃寒冷环境中15 min,之后在室温适应1 h,经腹腔注射毛果芸香碱滴眼液(0.25 mL/只),2 min后以安乐处死小鼠,取口腔、咽喉部黏膜组织进行HE病理学切片检查,以Western blotting法考察其IgA、pIgR蛋白的表达,采用ELISA法检测细胞因子IL-4、IL-6和IFN-y、TNF-a含量;采用免疫组化法检测ACE 2和ACE的表达情况.结果:UAID模型组小鼠唾液中SIgA含量显著低于正常组(P＜0.05),提示模型复制成功;与正常组相比,U AID模型组小鼠的口腔和咽喉黏膜组织可见轻度间质水肿、小血管扩张充血,中性粒细胞伴有淋巴管轻度扩张水肿;UAID模型组小鼠口腔、咽喉部黏膜组织IgA、pIgR蛋白表达,IgA相关细胞因子IL-4、IL-6的含量及pIgR相关细胞因子IFN-γ、TNF-a的含量均显著低于正常组(P＜0.05),该组的ACE、ACE 2平均光密度值(IOD/area)均显著性高于正常组(P＜0.05);利巴韦林喷剂组和RMK-03TM喷剂组的上述主要指标均在不同程度上优于UAID模型组,且后者的上述主要指标优于前者.结论:RMK-03TM皮肤黏膜护理喷剂通过调节局部黏膜免疫屏障低下相关IgA的含量,抑制呼吸道黏膜中ACE 2活性表达,间接推测其阻断SARS-CoV-2的Spike-ACE 2相互作用以提供黏膜免疫.
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