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基于CRISP R/Cas9构建Msx1?Cre小鼠模型

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目的:构建肌节同源盒基因1(Msx1)⁃Cre小鼠模型.方法:基于CRISPR/Cas9技术,设计靶向切割Msx1基因启动子下游的单链向导RNA(sgRNA),并构建包含Cre序列的同源重组片段;构建sgRNA载体质粒,转染至小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3),并在细胞水平验证sgRNA的打靶效率和脱靶情况;将靶向切割Msx1基因的sgRNA、Cre同源重组片段及Cas9蛋白等混合溶液经体外显微注射至C57BL/6J小鼠的受精卵,3周后获得小鼠,利用PCR技术鉴定获得的F0代Msx1⁃Cre小鼠,并将构建成功的Msx1⁃Cre模型小鼠与Rosa26R⁃mTmG模型小鼠交配,进行功能验证.结果:设计的sgRNA能够有效定点切割Msx1基因启动子下游靶位点;成功获得Msx1⁃Cre小鼠模型;Msx1⁃Cre模型小鼠与Rosa26R⁃mTmG模型小鼠交配,子代小鼠免疫荧光结果显示,小鼠绿色荧光蛋白(GFP)特异定位于表达MSX1细胞的细胞膜上.结论:成功构建了Msx1⁃Cre小鼠模型,可用于示踪Msx1基因以及在表达MSX1的牙间充质细胞中进行条件性敲除或过表达实验来研究牙发育过程中特定基因的功能.
Construction of Msx1-Cre mouse model based on CRISPR/Cas9

陈毅斌、李琳君、董碧莹、林陈胜

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福建省发育与神经生物学重点实验室·福建师范大学生命科学学院,福建 福州350108

CRISPR/Cas9 Msx1 Cre 小鼠模型

福建省自然科学基金面上项目

2019J01281

2020

10.3969/j.issn.1674?8603.2020.03.005

口腔生物医学
南京医科大学

口腔生物医学

CSTPCD
影响因子：0.423
ISSN：1674-8603
年,卷(期)：2020.11(3)
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