摘要
目的 探讨CC类趋化因子配体2(CCL2)对结核分枝杆菌感染人单核巨噬细胞THP-1自噬的影响及分子机制.方法 采用结核分枝杆菌H37 Rv株感染THP-1细胞,RT-PCR和Western blot检测CCL2的表达.在THP-1细胞中转染CCL2 siRNA,采用H37Rv感染下调CCL2的THP-1细胞,实验分为Mock组、H37 Rv组、H37 Rv+si-NC组和H37 Rv+si-CCL2组,采用RT-PCR和Western blot分析CCL2的表达,菌落形成单位计数分析H37Rv胞内存活率,Western blot检测自噬相关蛋白及NF-κB信号通路中关键蛋白p65、IKK-α和IκB-α的表达.给予NF-κB信号通路激活剂佛波酯(PMA),探讨其对H37Rv感染THP-1细胞自噬的影响.结果 H37 Rv感染THP-1细胞6 h CCL2 mRNA和CCL2蛋白开始逐渐升高,随着感染时间延长CCL2 mRNA和CCL2蛋白持续升高,于24 h达到最高水平,48 h又有所降低.H37 Rv感染THP-1细胞不同时间CCL2 mRNA和CCL2蛋白两两比较差异均有统计学意义(P<0.01).与Mock组比较,H37Rv组和H37Rv+si-NC组H37 Rv感染THP-1细胞中CCL2 mRNA、CCL2蛋白、LC3-Ⅰ、p62、p65、IKK-α 和IκB-α 表达升高,LC3-Ⅱ表达降低;与H37Rv组和H37Rv+si-NC组比较,H37Rv+si-CCL2组H37Rv感染THP-1细胞中CCL2 mRNA、CCL2蛋白、LC3-Ⅰ、p62、p65、IKK-α和IκB-α表达降低,LC3-Ⅱ表达升高,差异均有统计学意义(P<0.01).H37 Rv组和H37 Rv+si-NC组H37 Rv胞内存活率明显高于H37 Rv+si-CCL2组,差异有统计学意义(P<0.01).与H37Rv+si-CCL2组比较,H37Rv+si-CCL2+PMA组H37Rv感染THP-1细胞中LC3-Ⅰ和p62表达升高,LC3-Ⅱ表达降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 H37Rv感染THP-1细胞能够升高CCL2的表达,降低CCL2的表达可通过阻断NF-κB信号通路抑制H37 Rv感染THP-1细胞自噬.
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