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微小RNA-18a靶向Notch2抑制NIH-3T3细胞外基质相关基因的表达

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[背景]矽肺主要病理特征是肺部纤维化.矽肺发生发展过程中多种miRNAs具有调控作用.[目的]利用成纤维细胞系,探究微小RNA-18a(miR-18a)对细胞外基质相关基因表达的影响,并对其作用机制进行验证.[方法]在成纤维细胞系NIH-3T3细胞中转染miR-18a模拟物以及神经源性基因座Notch同源蛋白2(Notch2)基因的小干扰RNA(siRNA).通过应用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测Acta2、Col1a1及Notch2基因mRNA表达变化,通过蛋白质印迹技术检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Notch2蛋白的表达变化,利用双荧光素酶报告载体在人胚肾细胞HEK293T细胞中验证miR-18a调控Notch2基因的直接作用位点.[结果]qRT-PCR检测结果表明,在NIH-3T3细胞中,miR-18a模拟物过表达36 h抑制了Col1a1以及Acta2的mRNA表达(P<0.05),同时利用蛋白质印迹技术检测发现,miR-18a模拟物过表达48 h后α-SMA蛋白表达丰度降低.通过qRT-PCR未检测到过表达miR-18a 36 h对于Notch2基因表达的影响,通过蛋白质印迹技术检测发现过表达miR-18a模拟物36 h可以在蛋白水平上抑制Notch2的表达.双荧光素酶报告载体检测结果发现,在HEK293T细胞中,无论是过表达miR-18a模拟物或者抑制物24 h均证明了Notch2是miR-18a的直接靶基因.当Notch2被抑制36 h时,qRT-PCR检测发现Acta2和Col1a1基因表达下调(P<0.05);蛋白质印迹技术检测表明α-SMA在蛋白水平也受到抑制.[结论]本研究发现miR-18a可以通过直接作用于靶基因Notch2的3'UTR而抑制其表达,从而抑制成纤维细胞系NIH-3T3细胞外基质相关基因的表达.
Inhibiting effect of miR-18a on expression of extracellular matrix-related genes of NIH-3T3 by targeting Notch2

郝家祺、文静、刘春城、蔡禄

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内蒙古科技大学 生命科学与技术学院,内蒙古包头 014010

内蒙古科技大学 内蒙古自治区功能基因组生物信息学重点实验室,内蒙古包头 014010

矽肺 微小RNA-18a 神经源性基因座Notch同源蛋白2

国家自然科学基金国家自然科学基金内蒙古科技大学创新基金内蒙古科技大学创新基金内蒙古自治区高等学校科研项目

61671256620712592019QDL-B432019QDL-B44NJZY20096

2022

10.11836/JEOM21336

环境与职业医学
上海市疾病预防控制中心 中华预防医学会

环境与职业医学

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.71
ISSN：1006-3617
年,卷(期)：2022.39(7)
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