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核桃不同时期叶片及不同组织RNA提取方法筛选

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[目的]针对核桃组织中富含多酚、多糖及黄酮类物质含量较高的特点,筛选经济高效、适合核桃不同发育时期叶片及不同组织总RNA的提取方法.[方法]以核桃幼嫩、成龄和衰老叶片为材料,分别采用改良硼砂—CTAB法、改良硼砂—CTAB—异丙醇法、改良SDS法、改良Trizol法Ⅱ以及试剂盒法进行总RNA的提取.以筛选与优化的改良硼砂—CTAB法、改良硼砂—CTAB—异丙醇法分别提取核桃胚、叶柄、韧皮部、雄花的总RNA,并对RNA产量、纯度、电泳图谱和RT-PCR进行分析.[结果]5种方法都可获得核桃总RNA,其中,改良硼砂—CTAB法能够从幼嫩叶片、成龄叶片、叶柄和雄花中获得质量高、完整性好的总RNA,28SrRNA 亮度约为 18SrRNA 的2倍,A260/A280介于1.9〜2.1 之间,A260/A230 大于2.0,且总RNA质浓度可达1 185.2 ng·μL-1;改良硼砂—CTAB—异丙醇法则适合衰老叶片、胚和韧皮部的提取,总RNA质量浓度可达1 019.0 ng ·μL-1.通过RT-PCR在不同组织中均能扩增出核桃18SrRNA和翻译起始因子(JreIF1A)片段.[结论]改良硼砂—CTAB法和改良硼砂—CTAB—异丙醇法相比其他3种方法更易排除蛋白质、酚类等杂质干扰,对于不同时期不同组织均有更好的适用性,提取所获得的总RNA纯度和浓度完全符合后续的分子生物学试验要求.
Methods of Total RNA Extraction from Different Juglans regia Tissues and Leaves

陈浩、安瑞云、常青山、王梓、毛星夜

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河南科技大学林学院,河南洛阳471000

洛阳市隋唐城遗址植物园,河南洛阳471002

核桃 总RNA CTAB法 SDS法 Trizol法

河南省自然科学基金

182300410092

2020

10.13275/j.cnki.lykxyj.2020.06.007

林业科学研究
中国林业科学研究院

林业科学研究

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.996
ISSN：1001-1498
年,卷(期)：2020.33(6)
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