目的 构建体内裸鼠足垫肿瘤转移模型,探讨肿瘤相关性成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)对胆囊癌淋巴转移的影响.方法 收集病人胆囊癌和正常胆囊组织标本,通过酶消化法提取原代CAF和正常成纤维细胞(normal fibroblast,NF).利用免疫荧光实验和蛋白质印迹法(Western blot)鉴定CAF和NF;构建裸鼠足垫肿瘤转移模型,随机分为两组:CAF+NOZ组和NF+NOZ组,将相应的细胞植入小鼠足垫,通过活体动物成像系统定期观察记录同侧腘窝淋巴结转移情况.4周后,获取淋巴结并进行苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色和免疫组化分析肿瘤淋巴结转移情况.结果 从病人组织中成功提取出CAF和NF.免疫荧光结果显示α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在CAF中显著高表达,并且Western blot结果提示CAF中标志蛋白α-SMA和FAP明显高表达.在裸鼠足垫肿瘤模型中发现,相较于NF组,CAF组腘窝淋巴结明显肿大,差异具有统计学意义(P＜0.05).HF染色和细胞角蛋白-7(cytokeratin 7,CK7)的免疫组化染色发现,CAF组阳性淋巴结比率明显增加,差异具有统计学意义(P＜0.05),并且CK7表达明显增高.结论 通过构建裸鼠足垫肿瘤转移模型,证实CAF可以促进胆囊癌的淋巴转移.
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