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CircKat6b重组腺相关病毒制备及其在小鼠海马中的表达

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目的 获得表达circKat6b的重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus expressing circKat6b,rAVV-circKat6b),检测其在小鼠海马组织中的感染效率和表达水平.方法 将mmu-circKat6b基因片段插入腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)穿梭质粒中构建重组AAV质粒,将重组AAV质粒、包装质粒和辅助质粒通过脂质体LipoFiterTM共同转染293T细胞包装rAAV-circKat6b.从转染的293T细胞中收集并通过柱纯化rAAV-circKat6b,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定rAAV-circKat6b滴度.最后通过小鼠脑立体定位仪注射rAAV-circKat6b至小鼠海马组织中,1个月后免疫荧光显微镜观察rAAV-circKat6b的感染效率,qRT-PCR检测rAAV-circKat6b表达水平.结果 包装成功的rAAV-circKat6b经过纯化后获得了高滴度的rAAV-circKat6b,qRT-PCR检测rAAV-circKat6b的病毒滴度达到1.2×1012 vg/mL.感染1个月后,脑组织海马区域绿色荧光表达明显,circKat6b表达水平明显增加.结论 成功构建的rAAV-circKat6b可使小鼠海马组织中circKat6b高表达,这一研究结果为进一步研究circKat6b的生物学功能提供了实验基础.
Construction of circKat6b recombinant adeno-associated virus and its expression in the hippocampus of mice

胡娜、刘行、王敏睿、冯建国、贾静、王晓斌

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西南医科大学附属医院麻醉科 泸州646000

腺相关病毒 circKat6b 小鼠海马组织 抑郁症

四川省科技厅项目

2020YJ0493

2023

10.3969/j.issn.2096-3351.2023.02.011

西南医科大学学报
泸州医学院

西南医科大学学报

影响因子：0.407
ISSN：2096-3351
年,卷(期)：2023.46(2)
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