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适用于单细胞测序的肾脏消化及CD45+单细胞分离方法

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目的 比较Ⅳ型胶原酶和胰蛋白酶在不同时间对肾脏组织的消化效果,探讨磁珠分离法所得细胞对单细胞测序的适用性.方法 采用Ⅳ型胶原酶和胰蛋白酶消化肾脏组织,消化时间分别为15 min、30 min和15 min+15 min.比较两种消化酶在不同时间对肾脏组织的消化效果,选择消化效果最佳的方法进行消化,所得肾脏细胞悬液通过用磁珠法分离CD45+细胞.检测分离后所得细胞数量、活力、成团率并根据单细胞测序结果评价细胞状态.结果 肾脏组织在经酶作用30 min后基本被消化完全,在相同消化时间和方法下,Ⅳ型胶原酶消化效率明显优于胰蛋白酶.与直接消化30 min相比,15 min+15min消化所得细胞状态更好,细胞碎片少且背景干净.通过Ⅳ型胶原酶15 min+15min消化方式所得细胞悬液分离出的CD45+细胞的细胞总量、存活率、成团率等各项指标均符合单细胞测序要求.通过单细胞测序结果发现,细胞均表达CD45+,线粒体基因表达比例低,说明细胞在外界环境中被刺激的比例小.结论 在相同消化时间条件下与胰蛋白酶相比,Ⅳ型胶原酶对肾脏组织的消化效果好,有利于减少细胞碎片的产生,经磁珠分离所得CD45+肾脏单细胞悬液各项指标均符合单细胞测序要求且纯度高,有利于后续测序结果分析的准确性.
A kidney digestion and CD45+single cell isolation method suitable for single cell sequencing

贾建、谭睿陟、王丽

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西南医科大学附属中医医院中西医结合研究中心 泸州646000

单细胞测序 CD45+ 肾脏

四川省应用基础研究项目泸州市人才引进专项(蓝辉耀团队)西南医科大学附属中医医院青年苗圃项目

2020YJ04422020XYLH-080

2023

10.3969/j.issn.2096-3351.2023.03.007

西南医科大学学报
泸州医学院

西南医科大学学报

影响因子：0.407
ISSN：2096-3351
年,卷(期)：2023.46(3)
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