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实时荧光多酶恒温扩增技术检测小鼠细小病毒核酸的方法建立

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目的 旨在建立基于实时荧光多酶恒温扩增(exo-MIRA)技术的小鼠细小病毒(MVM)核酸检测新方法.方法 收集2021年1月至2022年1月南京大学医学院附属金陵医院实验动物室共75份小鼠肠道内容物标本.针对MVM VP2基因的保守区域设计4对引物,琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物以筛选最优引物对,并设计特异性荧光探针,构建exo-MIRA 检测法.通过检测梯度稀释模拟样本,进行检出限评价.检测其他小鼠病毒,包括仙台病毒(SV)、小鼠肝炎病毒(MHV)、小鼠鼠痘病毒(Ect)、小鼠肺炎病毒(PVM)、呼肠孤病毒(Reo),分析exo-MIRA法的交叉反应性.采用qPCR法和exo-MIRA法同时检测收集的75份标本,统计分析两种方法的一致性.以qPCR法为参比方法,评估该法的敏感度和特异度,进行诊断效能评价.结果 采用exo-MIRA技术建立MVM核酸检测方法,该方法检测MVM的检出限为10 copies/μL,且与其他五种小鼠病毒无交叉反应,可特异性检出MVM.75份标本检出结果显示,exo-MIRA法和qPCR法高度一致,Kappa值为0.921(P＜0.05),exo-MIRA法的敏感度为100.0％,特异度为96.7％.结论 建立了一种基于实时荧光MIRA恒温扩增技术的MVM核酸检测方法,具有简单快速、实验要求低、敏感特异等优点.该方法可应用于现场复杂环境的即时检测,在实验动物质量检测应用上有一定前景.
Development of a real-time fluorescence-based multienzyme isothermal rapid amplification for the rapid de-tection of minute virus of mice

minute virus of micemultienzyme isothermal rapid amplificationreal-time fluorescence-basedrapid detection

尤金炜、陈慧、马畅、张旭亮、董敏、杨阳、恽时锋

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210002南京,南京大学医学院附属金陵医院(东部战区总医院)实验动物室

210003南京,南京市第二医院精准医学中心

210002南京,南京大学医学院附属金陵医院(东部战区总医院)检验科

小鼠细小病毒 多酶恒温扩增技术 实时荧光 快速检测

军队实验动物专项科研课题中国博士后科学基金新冠肺炎疫情防控专项江苏省卫生健康委科研项目

SYDW[2020]-172020M670092ZXM2020029

2023

10.3969/j.issn.1672-271X.2023.03.001

东南国防医药
南京军区医学科学技术委员会

东南国防医药

CSTPCD
影响因子：0.992
ISSN：1672-271X
年,卷(期)：2023.25(3)
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