摘要
目的 姜黄素是印度香料姜黄中主要的姜黄类化合物.姜黄素在肿瘤增殖和侵袭方面的作用越来越受到重视.本研究探讨姜黄素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与侵袭的影响及其机制.方法 用不同浓度姜黄素处理MDA-MB-231细胞,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]法检测细胞增殖,Transwell小室法观察姜黄素对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响,FCM结合PI及Annexin V-FITC双标记染色测定细胞凋亡,Hoechst染色观察细胞形态变化.逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法分别检测PTN、MMP-9 mRNA和蛋白表达变化.结果 姜黄素30 μmol/L作用MDA-MB-231细胞24、48和72 h,细胞增殖抑制率分别为(24.20±0.91)％、(36.78±0.69)％和(37.41±0.41)％,姜黄素60 μmol/L作用24、48和72 h,细胞增殖抑制率分别为(37.41±0.41)％、(46.49±0.80)％和(53.84±1.50)％.各浓度组不同作用时间差异有统计学意义,F=17.327,P＜0.001;不同浓度组之间差异有统计学意义,F=861.916,P＜0.001;两者间存在协同交互效应.DMSO对照组与姜黄素30、60 μmol/L作用MDA-MB-231细胞24 h后,穿膜细胞数分别为(212.40±13.61)、(146.80±13.25)和(98.60±8.23)个/视野,穿膜细胞数呈剂量依赖性明显减少,细胞侵袭能力受抑,差异有统计学意义,F=959.002,P＜0.001;DMSO对照组与经过5、10、20、30和60 μmol/L不同浓度的姜黄素处理24 h后,各组坏死和凋亡晚期细胞百分率分别为(6.04±0.98)％、(8.71±1.15)％、(11.04±1.04)％、(20.97±1.20)％、(46.87±1.24)％和(56.31±1.87)％,差异有统计学意义,F=836.251,P＜0.001;姜黄素0(DMSO对照组)、30和60 μmol/L作用乳腺癌MDA-MB-231细胞24 h后,PTN mRNA相对比值分别为0.46±0.08、0.31±0.03和0.19±0.03,差异有统计学意义,F=20.848,P=0.002;MMP-9 mRNA相对比值分别为0.88±0.05、0.54±0.07和0.31±0.02,差异有统计学意义,F=91.370,P＜0.001.姜黄素0(DMSO对照组)、30和60 μmol/L作用乳腺癌MDA-MB-231细胞48 h后,PTN蛋白表达相对比值分别为0.48±0.03、0.30±0.03和0.11±0.02,差异有统计学意义,F=154.054,P＜0.001;MMP-9蛋白相对表达量分别为0.71±0.04、0.46±0.04和0.22±0.03,差异有统计学意义,F=105.941,P＜0.001.讨论 姜黄素能降低乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖与侵袭并诱导其凋亡,其机制可能通过下调PTN和MMP-9蛋白表达实现,这将为临床治疗乳腺癌提供新思路.
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