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皱纹盘鲍脯氨酰内肽酶的分离纯化及性质

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为探究脯氨酰内肽酶(PEP)在皱纹盘鲍性腺发育过程中的作用,实验采用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析皱纹盘鲍不同组织中PEP的表达情况.通过硫酸铵分级沉淀和连续柱层析,从皱纹盘鲍性腺中分离纯化得到高纯度天然PEP.利用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)鉴定肽片段序列,以Suc-Gly-Pro-MCA为底物分析PEP的酶学性质.利用圆二色谱分析温度对PEP结构的影响;采用免疫印迹(Western blot)和qRT-PCR分析鲍性腺在不同发育时期PEP的蛋白和基因表达水平.结果显示,皱纹盘鲍的性腺中,PEP基因表达量和酶活性最高.利用硫酸铵分级沉淀和连续柱层析,从性腺中分离纯化得到分子量约为82 ku,等电点约为5.5的PEP,LC-MS/MS分析得到502个氨基酸残基,与NCBI中皱纹盘鲍脯氨酰内肽酶(KY214290)一致.PEP的最适温度和最适pH分别为25°C和6.0,在15～25°C和pH 5～8条件下能够保持较高的活性.随着温度升高,PEP的二级结构有明显的改变,拟合热变性温度为(51.4±0.2)°C.PEP在雄性和雌性性腺的各个生长期均能被检出,在雄性性腺的成熟中期和雌性性腺的成熟后期表达量最高.研究表明,PEP在鲍性腺不同发育时期表达量的差异表明其可能参与性腺发育的过程.
Purification and characterization of a prolyl endopeptidase from Haliotisdiscushannai

陈守峰、杨汝晴、陈玉磊、孙乐常、张凌晶、刘光明、曹敏杰

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集美大学海洋食品与生物工程学院,福建厦门 361021

海洋食品深加工协同创新中心,辽宁大连 116034

皱纹盘鲍 脯氨酰内肽酶 纯化 性质分析 性腺发育

国家重点研发计划国家自然科学基金现代农业产业技术体系建设专项

2018YFD090100431772049CARS-49

2022

10.11964/jfc.20201212599

水产学报
中国水产学会

水产学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.148
ISSN：1000-0615
年,卷(期)：2022.46(12)
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