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针对微量细胞样本进行细胞核和线粒体基因组同步快速分离的方法研究

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开发了一种针对微量细胞样本进行细胞核和线粒体基因组同步快速分离的方法。该方法首先利用体积分数 1%非离子型表面活性剂NP-40 能够选择性破坏细胞膜而维持细胞核完整性的特征,实现了细胞的轻柔裂解和细胞核完整性的维持;其次通过差速离心,实现细胞核(核基因组)与线粒体基因组的同步分离。经过显微成像观察,核酸蛋白分析仪检测以及PCR分析,实现了从 102 到 106 个悬浮培养细胞中高质量线粒体基因组的分离纯化。本方法获取的线粒体基因组无核基因组污染,为后续开展线粒体群体遗传分析、线粒体疾病诊断提供了一种高效、快速、低成本的解决方案。
The Method of Simultaneous and Rapid Separation of Nuclear and Mitochondrial Genomes from Microcell Samples
In this study,we developed a method for simultaneous and rapid separation of nuclear and mitochondrial genomes for microcell samples.In this method,the 1%nonionic surfactant NP40 can selectively destroy the cell membrane and maintain the nuclear integrity,so as to achieve the gentle lysis of cells and the maintenance of nuclear integrity.Secondly,by differential centrifugation,the nuclear genome and mitochondrial genome are separated synchronously.Through microscopic imaging observation,nucleic acid protein analyzer detection,and PCR analysis,we achieved the isolation and purification of high-quality mitochondrial genomes from 102 to 106 suspension culture cells.The mitochondrial genome obtained by this method is free of nuclear genome contamination,which provides an efficient,rapid and low-cost solution for subsequent mitochondrial population genetic analysis and mitochondrial disease diagnosis.

mitochondrial isolation and purificationtrace cellsNP40 buffer

胡胜、胡哲、汪方奎

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公安部鉴定中心 现场物证溯源技术国家工程实验室 法医遗传学公安部重点实验室,北京 100038

华中农业大学 农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室,湖北 武汉 430070

线粒体分离纯化 微量细胞 NP40缓冲液

公安部鉴定中心开放课题

2019FGKFKT06

2024

山东化工
山东省化工研究院 山东省化工信息中心

山东化工

影响因子:0.249
ISSN:1008-021X
年,卷(期):2024.53(3)
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