摘要
对獭兔RAPD体系中Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度、基因组DNA浓度进行研究.结果表明:Taq酶浓度为1.0 U,引物浓度为10 pmol/μl,基因组DNA浓度为50 ng/μl时,可获得清晰、稳定性好的条带.优化的RAPD反应体系为:总体积为20.0 μl.10×Buffer(含Mg2+)为2.0μl;dNTPs(各2.5 mmol/L)为2.0 μl;Taq酶浓度为1.0 U,引物浓度为10 pmol/μl,基因组DNA浓度为50 ng/μl;超纯水为13.8 μl.PCR扩增条件为:97℃预变性7 min,94 ℃1 min,36 ℃退火1 min,72 ℃2 min,45个循环后,在72 ℃延伸10 min结束,4 ℃保存.PCR扩增产物通过1.4%的琼脂糖凝胶电泳检测.点样后,以2～3 V/cm电压降稳压电泳3.0～3.5 h.
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