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新型口腔细菌丝氨酸蛋白酶抑制剂Tannerpin的制备与结晶

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目的 ·采用生物化学和结构生物学的方法,制备和结晶高纯度的新型口腔细菌丝氨酸蛋白酶抑制剂Tannerpin.方法 ·通过氨基酸序列分析,在牙周疾病相关细菌中筛选得到新型丝氨酸蛋白酶抑制剂,并将其命名为Tannerpin;构建融合表达载体pSUMO3-Tannerpin,将其转入大肠埃希菌BL21(DE3)系统进行诱导表达;采用镍离子亲和层析、SUMO特异性蛋白酶2(SUMO-specific protease 2,SENP2)酶切和凝胶过滤层析组合的纯化方案对Tannerpin进行分离纯化,并经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行验证;而后,对该纯化蛋白的结晶条件进行筛选及优化,并对其作用底物进行筛选.结果 ·SDS-PAGE结果显示,SUMO3-Tannerpin融合蛋白在大肠埃希菌中成功表达.利用纯化方案去除该蛋白的融合标签后,获得了相对分子质量约为43000的Tannerpin.通过结晶条件的初筛和优化,最终在20℃、pH=6.0、沉淀剂为28％聚乙二醇3350和8％Tacsimate的条件下获得了分辨率为1.7Å的Tannerpin晶体.然而,未筛选到Tannerpin的作用底物.结论 ·成功制备了口腔细菌分泌的新型丝氨酸蛋白酶抑制剂Tannerpin及其晶体,或将为后续其结构分析及功能研究奠定基础.
Preparation and crystallization of a novel oral bacterial serine protease inhibitor Tannerpin

杨婷婷、许佳伟、周爱武、叶玮

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上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔预防科,上海交通大学口腔医学院,国家口腔医学中心,国家口腔疾病临床医学研究中心,上海市口腔医学重点实验室,上海 200011

遵义医科大学珠海校区,珠海 519040

上海交通大学医学院病理生理学系,上海 200025

口腔细菌 新型丝氨酸蛋白酶抑制剂 原核表达 纯化 结晶

2021

10.3969/j.issn.1674-8115.2021.10.004

上海交通大学学报(医学版)
上海交通大学

上海交通大学学报(医学版)

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.826
ISSN：1674-8115
年,卷(期)：2021.41(10)
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