目的 探究中药材提取物对诺如病毒的灭活作用及其机理,为预防食源性诺如病毒的爆发提供新的思路及依据.方法 制备蜂胶醇提物、鱼腥草水提物,用逆转录实时定量PCR法检测病毒的含量研究各提取物对诺如病毒的灭活的量效和时效关系,比较其与紫外线、二氧化氯、双氧水的灭活效果;用酶联免疫吸附测定病毒完整衣壳蛋白的含量以分析提取物对其破坏作用;PCR扩增特异性片段并进行测序分析研究提取物对病毒核酸的破坏,以进一步阐述灭活机理.结果 蜂胶醇提物和鱼腥草水提物对诺如病毒有灭活作用,在50 mg·mL-1作用30 min灭活率可达97.03％和97.88％,10 mg·mL-1二氧化氯作用30 min灭活率85.13％、9000μW·cm-2的紫外作用30 min后灭活率96.7％、5％双氧水作用30 min后灭活率81.09％;与对照组相比,鱼腥草水提物、紫外线、二氧化氯和双氧水处理后病毒外壳蛋白表含量明显下降,但是蜂胶醇提物对诺如病毒颗粒的破坏作用不显著.5种方法对病毒核酸均有破坏作用,3个特异性片段鱼腥草组和双氧水组均未能扩增成功,蜂胶组、紫外组仅扩增1个片段,二氧化氯组扩出了2个片段;序列分析显示,开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)ORF2和ORF3均未被扩出,蜂胶醇提物与紫外线对诺如病毒核酸突变主要作用于ORF1中VPg、Pro及RdRp蛋白位点;而鱼腥草水提物与双氧水对诺如病毒ORF1核酸无突变效应.结论 蜂胶醇提物、鱼腥草水提物对诺如病毒均有较高的灭活率,两者对病毒核酸均有明显的破坏作用,鱼腥草水提物尚能破坏病毒外壳蛋白的结构.
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