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新型耐热耐酸普鲁兰酶的分离纯化与酶学特性分析

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从泡盛曲霉(Aspergillus awamori)XF发酵液中分离纯化普鲁兰酶(PulXF)并研究其酶学性质.通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析、凝胶过滤层析和疏水层析,纯化得到一种电泳纯的PulXF.纯化倍数8.16倍,比活力为309.28 U/mg.SDS-PAGE检测得单条带,表明PulXF为单亚基蛋白,分子量63.7 kDa.在50～80℃,pH4.5～8.0范围内,酶能保持高活性,最适反应温度60℃,最适pH5.0.在较广的pH范围内(pH3.0～8.0),28℃下,经过24 h酶活能保持80％以上活性.Km值和Vmax分别为0.92 mg/mL和11.90 μmol/min.酶活测定及TLC分析显示PulXF对普鲁兰多糖有强水解活性,终产物麦芽三糖;对支链淀粉和可溶性淀粉有较弱活性,对直链淀粉、α-环糊精、β-环糊精和糖原无活性.表明从泡盛曲霉XF分离的PulXF属于Ⅰ型普鲁兰酶.Ca2+、ZB2+和Mg2+能够促进酶的活性,其中Ca2+激活作用最强.而PulXF在5％浓度的SDS、CTAB、Tween 80和30％的乙醇中保持高稳定性.基于PulXF在苛刻环境下的高稳定性及高活性,很有希望在淀粉加工、食品饮料等领域以及需要在高温、高酸环境下使用的生物技术工业中使用.
Purification and Enzymatic Characterization of a Novel Acid-resistant and Thermostable Pullulanase

高兆建、陈雪莲、王先凤、许祥、李宝林、焦魏、芦宁、尚业成

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徐州工程学院食品(生物)工程学院,江苏徐州221018

江苏智荟生物科技有限公司,江苏徐州221018

邳州市金大地肥料有限公司,江苏徐州221018

普鲁兰酶 泡盛曲霉XF 分离纯化 酶学性质

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BE2016316BC2013417BN2015021

2019

食品工业科技
北京一轻研究院

食品工业科技

CSTPCD北大核心
影响因子：0.842
ISSN：1002-0306
年,卷(期)：2019.40(4)
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