摘要
目的:优化龟甲蛋白提取工艺,筛选龟甲促成骨细胞(MC3T3-El)增殖活性组分.方法 :以蛋白含量及对MC3T3-El细胞增殖率为指标筛选龟甲蛋白提取方法;以料液比、提取温度、时间为自变量,龟甲蛋白含量为因变量,进行单因素提取研究,结合响应面试验设计,获得提取龟甲蛋白最佳工艺;通过超滤技术将龟甲蛋白按分子量分为5个不同组分:总提组分(组分1),Mw>10 kDa组分(组分2),Mw:3～10 kDa组分(组分3),Mw:l～3 kDa组分(组分4),Mw<l kDa组分(组分5),CCK8法测定不同浓度龟甲蛋白(12.5、25、50、100、200 μg/ml.)及其不同组分对MC3T3-El细胞增殖率的影响.结果 :磁力搅拌方法得到的龟甲蛋白含量最高,且活性最佳,龟甲蛋白最佳提取条件为料液比1:13(g/mL)、提取温度30℃、提取3 h,此条件下测得龟甲蛋白含量为15.16％;龟甲蛋白不同组分均能促进MC3T3-El前成骨样细胞增殖,并呈浓度依赖性,在浓度为200 μg/mL时,组分1～5对细胞的增殖率分别为20.58％、25.30％、30.24％、37.89％、38.15％,分子量小于1 kDa的组分促MC3T3-El细胞增殖活性最佳.结论 :本研究为龟甲蛋白的制备工艺提供参考,并证明龟甲蛋白及其不同组分均具有较好的促成骨细胞增殖活性,其中分子量小于1 kDa组分对MC3T3-El细胞增殖的效果最佳.
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