SrtA蛋白在大肠杆菌中的高效表达与活性鉴定

High-efficiency Expression and Activity Identification of SrtA Protein in Escherichia coli

张秀娟 ¹于海威 ¹刘栋琦 ¹赵晋彤 ¹熊向华²

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作者信息

1. 哈尔滨商业大学药学院,黑龙江哈尔滨 150076
2. 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,北京 100071
折叠

摘要

按大肠杆菌偏好优化密码子并合成高活性突变型srtA基因,构建Trx蛋白共表达载体pTIG-srtA,转入大肠杆菌BL21(DE3)后低温诱导表达,通过Ni2+柱亲和层析纯化SrtA蛋白,连接LHN-LPETG和G-HC蛋白检测SrtA蛋白活性.菌液PCR鉴定和测定序列比对结果显示,构建pTIG-srtA载体成功;SDS-PAGE及Western Blot分析结果显示,在大肠杆菌中实现了SrtA蛋白的可溶性高表达,Ni2+柱亲和层析后得到纯度大于95％的SrtA蛋白,LHN-LPETG和G-HC蛋白成功连接表明,原核系统表达纯化的SrtA蛋白具有良好的转肽酶活性.

关键词

SrtA/密码子优化/酶连接法/A型肉毒毒素

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基金项目

国家科技重大专项资助项目(2018X09J18105-003)

出版年

2021

食品工业科技

北京一轻研究院

食品工业科技

CSTPCD北大核心

影响因子：0.842

ISSN：1002-0306

参考文献量15

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