摘要
为了抑制对虾养殖急性肝胰脏坏死病(AHPND)的主要病原菌副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus),本论文用药食同源的天然草本黄精和8种水产用抗生素联合抑制副溶血弧菌,通过棋盘法测定黄精和抗生素的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和联合抑菌效果,研究了黄精等对细菌细胞膜电导率、膜电位和存活率的作用,采用RT-PCR研究了黄精等对细菌外排泵相关基因表达的影响.结果表明,黄精和土霉素具有较好的协同抑菌效果,最佳配比为1/8 MIC黄精+1/4 MIC土霉素,此时分级抑菌浓度(fractional inhibitory concentration,FIC)为0.38,但在羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)的存在下,这种协同作用转为相加甚至无关作用.电导率、膜电位和碘化丙啶染色证明黄精能破坏副溶血弧菌细胞外膜,提高其渗透性,导致细胞内膜去极化,膜两侧质子梯度消失.黄精显著抑制副溶血弧菌5个外膜蛋白、5个反向协同运输子和11个RND外排转运子的表达,其中vpa0096(OmpW)下调497.51倍,vp0425(TolC)、vp2072(Na+/H+反向协同运输泵)、vp2665(Na+/Ca2+交换蛋白)、vp1092、vp0941、vp1178、vpa0344和vpa0809分别下调27.03倍、73.53、55.56、100.00、35.71、37.74、49.02和56.18倍.黄精降低TCA循环关键酶苹果酸脱氢酶(MDH)和琥珀酸脱氢酶(SDH)酶活,从而抑制副溶血弧菌体内TCA循环.土霉素是vp0425(TolC)的底物之一,黄精属于天然外排泵抑制剂,能将土霉素阻留在细胞内,提高土霉素的抑菌效果.黄精和土霉素协同作用于水产养殖的弧菌病,大幅度缩减土霉素使用浓度、残留风险和耐药性弧菌的出现,从而促进水产养殖的健康发展.
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