摘要
为了提高重组蔗糖磷酸化酶的表达水平,本研究通过单因素实验,研究了不同的碳源、氮源、稳定剂和金属离子对重组蔗糖磷酸化酶在大肠杆菌中表达的影响,并通过正交试验确定了最优的重组蔗糖磷酸化酶表达培养基的成分.另外,本研究也考察了不同的化学试剂和金属离子对重组蔗糖磷酸化酶的活性影响.结果表明,维生素C和FeCl2显著(P<0.01)抑制了蛋白的表达,Cu2+和Zn2+完全抑制了菌体的生长,而淀粉、K+和Mg2+对重组蔗糖磷酸化酶的表达具有一定的促进作用,且三者的协同作用可以极大的提高重组蔗糖磷酸化酶的表达效率.其中在50 mL LB培养基中加入0.5％淀粉、0.1％K+和0.05％Mg2+的组合,总酶活达1207.83 U,比优化前提高了3.6倍.,Fe2+(10 mmol/L)、Mg2+(10 mmol/L)、牛血清蛋白(1％)和土温80(0.1％)均可在一定程度上提高该酶的活性.
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