摘要
血管紧张素转换酶2(Angiotensin converting enzyme 2,ACE2)是参与血压调节的关键酶之一,由于传统的ACE2纯化方法难度大、效率低,因此,有必要优化其分离纯化方法,为ACE2的基础研究提供保障.本研究以猪肾为原材料,通过酸沉淀、硫酸铵盐析,结合DEAE-Sepharose、Q-Sepharose及Phenyl Sepharose柱层析对ACE2进行分离纯化.探究了温度、pH、金属离子、抑制剂对纯化的ACE2的活性影响,并通过PAS染色验证其是否为糖蛋白.实验结果表明,纯化的ACE2分子量约为98 kDa,纯化倍数为149.8,得率为0.1％.对ACE进行质谱鉴定,得到41个肽段,与猪ACE2的氨基酸序列高度一致.酶学性质研究结果表明,ACE2为金属蛋白酶,最适pH为7.0,最适温度为40℃.Zn2+能激活其活性,而金属离子Cu2+、Fe3+和Cd2+对ACE2的活性有抑制作用.圆二色谱分析发现,ACE2的热变性温度为67.5℃.PAS染色结果显示猪ACE2为糖蛋白.本研究结果可为天然ACE2的高效纯化提供参考,也有助于推进以ACE2为靶点的功能性食品开发.
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