摘要
目的:探讨天麻素对D-半乳糖诱导的BV2细胞衰老的保护作用及机制.方法:使用不同浓度(10、20、30和40μg/mL)的D-半乳糖刺激BV2细胞24 h,建立细胞衰老模型,并用CCK-8法筛选出D-半乳糖的最佳造模浓度;实验分为4组:正常组、模型组、Silent mating type information regulation 2 homolog 3(SIRT3)抑制剂+天麻素组和天麻素组;用CCK-8法检测不同浓度(10、20、30、40和50μmol/L)的天麻素对D-半乳糖刺激的BV2细胞活力的影响,并筛选出最佳的天麻素浓度;使用β-半乳糖苷酶(Senescenceβ-Galactosidase,SA-β-Gal)染色检测细胞衰老面积;使用生化法检测各组细胞活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平;使用Enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)法检测各组细胞神经炎症因子IL-1β(Interleukin 1β,IL-1β)、IL-6(Interleukin 6,IL-6)和TNF-α(Tumor necrosis factorα,TNF-α)水平;使用免疫荧光法检测各组细胞SIRT3荧光强度;使用Western Blot法检测细胞SIRT3、P16和P21的蛋白表达水平.结果:30μg/mL的D-半乳糖刺激BV2细胞活力极显著降低(P<0.01),引起BV2细胞中SA-β-Gal染色面积和衰老蛋白P16和P21表达极显著增加(P<0.01),细胞中ROS水平和炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平极显著增高(P<0.01),细胞内SIRT3蛋白表达极显著降低(P<0.01).而30μmol/L天麻素能极显著提高D-半乳糖刺激的BV2细胞活力(P<0.01),并且极显著降低细胞SA-β-Gal染色面积和衰老蛋白P16和P21表达水平(P<0.01),极显著降低ROS水平和神经炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平(P<0.01),极显著提高细胞内SIRT3蛋白荧光强度和表达水平(P<0.01).结论:天麻素能够提高D-半乳糖刺激的BV2细胞活力,改善BV2细胞衰老染色和衰老蛋白表达,并降低ROS水平和减缓炎症反应,这可能与天麻素提高SIRT3蛋白表达有关.
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