摘要
目的:确定碱性蛋白酶酶解鹿鞭肽最佳工艺条件,并探究其体外补肾健骨活性.方法:以酶解温度、pH、酶解时间和酶用量为影响因素,水解度为响应指标,在单因素实验的基础上,结合Box-Behnken方法进行响应面试验设计,获得酶解鹿鞭肽的最佳工艺;探究不同浓度的鹿鞭肽对小鼠睾丸间质细胞(TM3)的存活率以及睾酮(Testosterone,T)的分泌影响和对成骨细胞(MC3T3-E1)的存活率、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活力以及骨钙素(Osteocalcin,OCN)的分泌影响.结果:最佳酶解工艺条件为温度51℃,pH8.7,时间4.1 h,酶用量1300 U/g,此时水解度为40.36％±0.22％;体外活性实验结果表明,TM3细胞不同浓度(25、50、100、200μg/mL)给药组与模型组相比较,均可显著提高细胞存活率和睾酮的分泌(P<0.05),并在50μg/mL质量浓度下,鹿鞭酶解肽对TM3细胞的T分泌促进作用最强,其分泌量为42.47 ng/mL;MC3T3-E1细胞不同浓度(25、50、100、200μg/mL)给药组与模型组相比较,细胞存活率和ALP活力、OCN分泌都有显著提高(P<0.05),并在50μg/mL质量浓度下,ALP活力及OCN分泌作用最显著,ALP活力为6.80金氏单位/g prot,OCN分泌量为15.63 ng/mL.结论:本实验通过响应面法确定了鹿鞭肽的最佳酶解工艺,验证了鹿鞭酶解肽具有较好的体外补肾健骨活性,为以后鹿鞭的综合开发利用提供一定的理论基础.
基金项目
国家自然科学基金(81373936)
吉林省科技发展计划重点项目(20160209006YY)
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