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豇豆血红蛋白LbⅡ在大肠杆菌中的重组表达条件优化、纯化与鉴定

Optimization of Expression Conditions, Purification and Identification of the Recombinant Cowpea Hemoglobin LbⅡin Escherichia coli

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豇豆根瘤中含有大量豆血红蛋白.该蛋白是良好的天然色素,可用于人造肉的着色,本文将携带豇豆血红蛋白LbⅡ基因的质粒pET-15b转化进入大肠杆菌BL21中表达,并对表达条件进行优化.通过查找NCBI数据库得到一条全长456 bp的豇豆血红蛋白LbⅡ的序列,以pET-15b作为表达载体,大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-R-IL作为重组工程菌进行表达,成功表达出豇豆血红蛋白LbⅡ,并使用镍柱层析对蛋白进行初步纯化,同时添加抗坏血酸为抗氧化剂.以IPTG浓度、温度、时间为自变量,LbⅡ表达量为因变量进行单因素实验.结果表明,在IPTG终浓度为1.0 mmol/L、诱导温度为25℃,时间为14 h时,重组豆血红蛋白LbⅡ的表达量最高,经SDS-PAGE凝胶电泳和可见光光谱分析法鉴定为目的蛋白LbⅡ.经响应面试验优化后,表达量可以达到7.30μg/mL.本研究为后续使用工程菌发酵生产豆血红蛋白奠定了基础.

刘萌、王聪睿、刘波、赵祥忠

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齐鲁工业大学(山东省科学院)食品科学与工程学院,山东济南 250353

豇豆 血红蛋白 响应面优化 重组表达

山东省重点研发计划重大科技创新工程项目

2020CXGC010604

2023

10.13386/j.issn1002-0306.2022050015

食品工业科技
北京一轻研究院

食品工业科技

CSTPCD北大核心
影响因子：0.842
ISSN：1002-0306
年,卷(期)：2023.44(4)
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