摘要
牛乳中β-酪蛋白含有多种变异体,其中A1β-酪蛋白(A1)和A2β-酪蛋白(A2)是其最常见的 2种变异体.由于A1和A2蛋白在氨基酸序列上仅存在个别氨基酸的差异,因此通过常规的分离、纯化手段较难以实现纯度较高的A1和A2蛋白的制备.本研究利用分子生物学手段,分别构建含有CSN2-A1和CSN2-A2目的基因的重组质粒载体pET28a(+)-CSN2-A1和pET28a(+)-CSN2-A2.将构建的重组表达载体导入到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达和纯化.结果表明,在 0.2 mmol/L IPTG,37℃下诱导表达 4 h可获得大量蛋白,但通过SDS-PAGE电泳显示目的蛋白以包涵体形式表达,存在于细胞破碎后的沉淀中.通过洗涤、溶解、镍柱亲和色谱纯化、复性以及鉴定等步骤最终可获得纯度大于 90%(PAGE)的A1和A2重组蛋白,从而为制备A1和A2蛋白提供新的途径.
基金项目
上海乳业生物工程技术研究中心项目(19DZ2281400)
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