PMA-qPCR联用快速检测苹果中扩展青霉活菌

Rapid Detection of Viable Penicillium expansum in Apple by PMA-qPCR

阳瑾 ¹丁宇 ¹于吕健 ¹范盈盈 ²刘峰娟 ²赵雪祺 ³焦子伟 ⁴王成²

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作者信息

1. 伊犁师范大学生物与地理科学学院,新疆伊犁 835000;新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,农业农村部荒漠绿洲生态区特色农产品功能营养与健康重点实验室(部省共建),农业农村部农产品质量安全风险评估实验室(乌鲁木齐),新疆农产品质量安全实验室,新疆乌鲁木齐 830091
2. 新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,农业农村部荒漠绿洲生态区特色农产品功能营养与健康重点实验室(部省共建),农业农村部农产品质量安全风险评估实验室(乌鲁木齐),新疆农产品质量安全实验室,新疆乌鲁木齐 830091
3. 新疆农业大学食品科学与药学学院,新疆乌鲁木齐 830052
4. 伊犁师范大学生物与地理科学学院,新疆伊犁 835000
折叠

摘要

目的:为建立一种叠氮溴化丙锭(Propidium Monoazide,PMA)与实时定量聚合酶链式反应(Quantitative real-time Polymerase Chain Reaction,qPCR)联用的快速检测扩展青霉活菌方法.方法:通过优化PMA处理浓度、黑暗孵育及曝光时间,筛选扩展青霉特异性引物,结合qPCR技术,建立一种基于PMA-qPCR联用快速检测扩展青霉活菌的方法,构建定量标准曲线,应用于人工污染的苹果样品中活菌的检测,与平板菌落计数比较评估该方法的可靠性.结果:PMA处理浓度 10 μg/mL、黑暗孵育 5 min、曝光 10 min为最佳PMA处理条件.4种引物中Pexp-patF对扩展青霉具有极强的特异性,可作为引物用于PMA-qPCR检测.构建的定量标准曲线的R2= 0.9948,最低检测限为 102.6 CFU/mL,方法检测结果与平板菌落计数无明显差异,并发现在苹果的未腐烂部分中可检测出扩展青霉活菌.结论:研究建立的PMA-qPCR技术可应用于苹果中扩展青霉活菌的检测,为扩展青霉精准防控提供一定技术支撑.

关键词

扩展青霉/叠氮溴化丙锭/实时定量聚合酶链式反应/苹果/活菌

Key words

Penicillium expansum/propidium monoazide/quantitative real-time polymerase chain reaction/apple/viable cell

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基金项目

国家重点研发计划(2019YFC1604502)

伊犁师范大学高层次人才项目(YLSDXSDTR22001)

出版年

2023

食品工业科技

北京一轻研究院

食品工业科技

CSTPCD北大核心

影响因子：0.842

ISSN：1002-0306

被引量1

参考文献量13

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