摘要
研究建立一种以氮掺杂碳点(Nitrogen-carbon dots,N-CDs)为荧光探针,可快速、准确、灵敏检测鲜牛奶中碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)的荧光分析方法.采用水热法,用乙二胺为氮源和邻苯二酚为碳源制备一种绿色荧光N-CDs,并采用透射电子显微镜(TEM)、紫外可见吸收光谱(UV-vis)、X射线电子能谱(XPS)和傅里叶红外光谱(FT-IR),对所合成的材料表面形貌、表面基团及光吸收特性进行表征,并通过对照试验对利用N-CDs构建检测ALP荧光分析方法的可行性进行验证.以检测体系中工作缓冲液的pH、底物硝基苯磷酸二钠(Disodium p-nitrophenyl phosphate,PNPP)的浓度、酶促反应时间为单因素,优化检测ALP的最佳条件,并建立相应的标准曲线.结果表明,材料表征结果也与以往报道的相符,N-CDs合成成功.最佳工作缓冲液为Tris-HCl(20 mmol/L,pH10),最佳PNPP浓度为 1 mmol/L,最佳酶促反应时间为 50 min.在最优条件下,ALP的活性浓度与 N-CDs的荧光强度变化建立良好的线性关系,线性回归方程为:Y=15397.05X+70344.46(R2=0.995),线性范围在 0.01～25 U/L,检测限(LOD)为 0.001 U/L(S/N=3).在两种鲜牛奶中添加回收率在100.1%～107.2%之间,变异系数小于 14.3%,表明该方法具有较好的准确性和可靠性.本研究为鲜牛奶中ALP的检测提供了一种准确高效的方法.
基金项目
广州市科技计划(202102021002)
广东省教育厅普通高校青年创新人才项目(2022KQNCX055)
广东大学生科技创新培育专项资金"攀登计划"项目(pdjh2021b0368)
广东大学生科技创新培育专项资金"攀登计划"项目(pdjh2022b0382)
广东大学生科技创新培育专项资金"攀登计划"项目(pdjh2023b0386)
华南农业大学大学生创新创业训练计划(202110564080)
华南农业大学大学生创新创业训练计划(202110564077)
广东第二师范学院大学生创新创业训练计划(202314278105)
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