摘要
目的:了解杂合抗菌肽NK-LPd的抑菌活性,探讨进一步开发潜力.方法:用两个甘氨酸作接头连接NK-lysin和Piscidin的活性片段,生物信息学技术预测杂合抗菌肽的理化性质和功能结构,根据毕赤酵母(Pichia pastoris)的密码子偏好性优化杂合抗菌肽NK-LPd基因序列,重叠延伸聚合酶链式反应(gene splicing by overlap extension polymerase chain reaction,SOE-PCR)扩增基因并与分泌型表达载体pPIC9K连接,通过化学法将其转化至毕赤酵母KM71感受态细胞中,经 0.5%甲醇诱导表达和亲和纯化后获得杂合抗菌肽NK-LPd,评价其抗菌活性.结果:成功构建了KM71/pPIC9K-NK-LPd,经诱导表达 5 d后上清液中获得了相对分子质量约 6 kDa的表达产物,与预期大小相符;抗菌活性实验表明,NK-LPd对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有较强的抑菌活性,与母体肽相比,杂合抗菌肽NK-LPd的抑菌活性显著增强.结论:设计并在毕赤酵母KM71中分泌表达了杂合抗菌肽NK-LPd,其抑菌活性优于母体肽.本研究可为新型杂合抗菌肽的设计和生产提供技术参考.
基金项目
重庆市技术创新与应用发展专项面上项目(CSTB2022TIAD-LDX0006)
重庆科技学院研究生科技创新计划(YKJCX2020528)
重庆科技学院研究生科技创新计划(YKJCX2220514)
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