摘要
豆血红蛋白是一种植物源血红蛋白,在植物蛋白肉加工中可作为重要的风味催化剂和着色剂,大大增加植物蛋白肉的拟真性.为实现豆血红蛋白在食品级微生物中的异源表达,将携带豆血红蛋白LBC2基因的质粒PESC-TRP转入酿酒酵母CEN.PK2-1C中,通过添加kozak序列促进其翻译,并进一步对启动子序列进行选择,以提高豆血红蛋白表达量.对重组菌株进行发酵,用Western blot分析LegH蛋白表达水平.结果显示,诱导型启动子GAL1,10较三种组成型启动子TEF1、ADH1、GAP在表达LegH能力上具有显著优势,较产量最低的ADH1启动子提升了 3.93倍.在组成型启动子中,TEF1启动子能力较优,是ADH1启动子的 2.91倍,是GAP启动子的1.2倍.最后,利用Ni柱亲和层析对蛋白进行浓缩纯化,测得LegH发酵浓度为 2.79 mg/L.本研究成功实现了豆血红蛋白在酿酒酵母中的异源表达,经后续优化有可能成为豆血红蛋白异源表达的又一途径.
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