摘要
为了实现大麻二酚酸合成酶(CBDAS)的微生物底盘高效表达,为体外合成大麻二酚(CBD)提供重组酶.首先从高CBD含量大麻叶片中克隆CBDAS基因,利用生物信息学方法分析其蛋白的基本理化性质,构建重组质粒pPIC9K-CBDAS后转化毕赤酵母菌,筛选重组蛋白CBDAS高表达的培养条件,并分析CBDAS的催化活性.结果表明,构建的pPIC9K-CBDAS融合蛋白表达系统能在毕赤酵母中表达;在甲醇添加量为 1%、培养基pH6.0和培养 48h的诱导条件下表达量最大;重组酶CBDAS催化底物大麻萜酚酸(CBGA)反应 4h后大麻二酚酸(CBDA)含量显著增加(P<0.05),在 8h后 CBD含量显著增加(P<0.05),在 12h时合成 CBDA和CBD量达到最大值;CBDAS在大麻叶片大麻萜酚酸(CBGA)粗提液和CBGA标品中反应 12h后分别生成CBDA 60.64和 20.12 ng/mL,CBD 128.01和 207.87 ng/mL,具有较强的催化活性.通过酵母异源表达实现了大麻CBDAS的重组表达,为经济高效地合成CBDA和CBD提供活性酶.
基金项目
黑龙江省自然科学基金(LH2020B022)
黑龙江省自然科学基金(LH2020C097)
黑龙江工业大麻创新专项(ZX2020-2021)
黑龙江省汉麻高效技术研发与示范项目(SF2019-2020)
黑龙江省麻类药用体系项目(MLYY2022)
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