摘要
为了构建一株可以生产乙醇酸的食品安全菌株,对枯草芽孢杆菌开展了代谢改造.本研究首先利用同源重组手段将外源异柠檬酸裂解酶基因aceA整合到了枯草芽孢杆菌基因组上,构建了出发菌株 164MCT-GA,然后利用代谢工程手段进行了乙醇酸合成代谢优化.结果表明,整合外源异柠檬酸裂解酶基因aceA的出发菌株 164MCT-GA可以实现以甘油为底物的乙醇酸从头合成,摇瓶发酵产量为 0.114 g/L;在此基础上,过表达柠檬酸合成酶基因(citA),加强前体物供应;过表达乙醛酸还原酶基因(yvcT)、敲除乳酸脱氢酶基因(ldh)、磷酸乙酰转移酶基因(pta)、乙酰-CoA转乙酰酶基因(mmgA、yhfs),从而减少碳源损失并提高乙醇酸转化率,最终得到的工程菌GA3-52,其摇瓶发酵产量为 0.572 g/L,是出发菌株的 5倍以上,产率为 0.175 g/g甘油,本研究首次在枯草芽孢杆菌中利用乙醛酸循环进行乙醇酸的从头合成,为食品安全菌高产乙醇酸的发酵生产奠定了基础.
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