摘要
为开发安全高效且易吸收的补锌剂,利用碱性蛋白酶酶解和乳酸菌发酵相结合的方法制备生物活性肽,并以此多肽制备了酪蛋白肽锌螯合物.采用光谱法对螯合物结构进行表征,利用体外消化模型和Caco-2细胞实验对其胃肠消化特性及生物安全性进行评价.结果表明,制备酪蛋白肽的最优条件为酶解pH为 9、碱性蛋白酶添加量为 0.3%(w/v),乳酸菌发酵时间为 12 h,此时反应体系中多肽含量为 142.39±0.95 mg/g,对锌的螯合率为31.41%±0.97%.与锌螯合后,酪蛋白肽表面的致密结构遭到破坏,形成疏松的状态;光谱学分析表明,Zn2+能与酪蛋白肽上的活性基团进行结合,螯合位点为羧基氧、羟基氧和氨基.体外模拟消化结果显示,酪蛋白肽锌螯合物在消化过程中锌溶解性优于硫酸锌;在胃肠消化后酪蛋白肽锌螯合物DPPH和ABTS+自由基的清除能力分别提升了 26.19%±3.30%和 71.96%±7.06%,而铁还原力下降了 36.26%±2.80%;同时,在消化过程中肽锌螯合物的β-转角与无规则卷曲含量减少,β-折叠结构增加,Zn2+起到了维持多肽结构的作用.细胞实验表明,当浓度大于0.4 mg/mL时,肽锌螯合物胃肠道消化物对Caco-2细胞表现出一定的细胞毒性.最后,利用质谱技术分别从酪蛋白水解物和肽锌螯合物中鉴定出 15条和 13条乳源多肽.研究结果可以为高效安全的酪蛋白肽锌补充剂的制备和应用提供科学依据.
基金项目
广东省基础与应用基础研究基金(2020A1515110211)
广东省普通高等学校特色创新项目(2021KTSCX132)
东莞理工学院高层次人才创新团队科研启动项目(KCYCXPT2017007)
广东省创新强校创新团队项目(2021KCXTD035)
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