摘要
为了高效制备高纯度的抗杀螟硫磷纳米抗体,本研究对一株低表达水平的重组抗杀螟硫磷纳米抗体在大肠杆菌中的表达条件进行优化,以IPTG浓度、温度为自变量,Nb表达量为因变量进行单因素实验,同时对抗体纯化方法进行研究.结果表明,在 37℃、无IPTG条件下抗杀螟硫磷纳米抗体表达量最高,达到 6 mg/L,并且发现IPTG用量与诱导温度存在交互效应,通过Ni亲和层析与凝胶过滤层析两步纯化法,最终得到了纯度 98%以上的抗杀螟硫磷抗体,表明该表达与纯化策略可以高效制备抗杀螟硫磷纳米抗体.利用所获得的纳米抗体,建立了ic-ELISA检测方法,其IC50 为 5.81 ng/mL,检出限为 0.25 ng/mL,检测范围为 0.78～43.07 ng/mL.选择生菜和白菜为样品进行添加回收实验,添加回收率在 93.3%～111.7%之间,变异系数(CV)值在 2.3%～18.2%之间.基于杀螟硫磷纳米抗体所建立的方法灵敏度高,能够满足国标规定的杀螟硫磷监测需求,可用于杀螟硫磷的快速筛查.本研究为开发高效快速的杀螟硫磷免疫检测方法奠定了基础.
基金项目
广东省基础与应用基础研究基金(2021A1515110513)
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