摘要
目的:原核表达甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A)HmpA蛋白,并对其进行生物信息学分析,为研究副甲菌HmpA蛋白对于宿主体内一氧化氮(NO)信号通路的影响提供理论参考.方法:PCR扩增hmpA基因,亚克隆至T载体后,再构建pNdeI-hmpA表达载体,转化BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测蛋白表达形式,利用Histrap预装柱亲和纯化HmpA蛋白,并用Western blot鉴定,生物信息学多方法分析HmpA蛋白特征.结果:成功构建了原核表达载体pNdeI-hmpA,低温诱导时,HmpA蛋白以包涵体和可溶表达形式并存;纯化后的HmpA蛋白可被His标签抗体检测.生物信息学分析提示HmpA蛋白为亲水性蛋白;无跨膜结构域、无信号肽;蛋白二级结构主要由α螺旋与不规则卷曲构成,三级结构模型类似环状;蛋白结构域分析表明含有 1个功能结构域,属于PRK13289超级家族;共有 32个磷酸化位点;与沙门氏菌多个降解硝酸盐和杀伤性NO的蛋白酶或转录因子存在关联.结论:本研究成功利用基因工程技术获得了甲型副伤寒沙门氏菌HmpA蛋白,并通过生物信息学方法预测了其部分生物学特征,为后续揭示甲型副伤寒沙门氏HmpA蛋白对于宿主体内的一氧化氮信号通路的影响提供理论支持.
基金项目
国家自然科学基金(31960033)
国家自然科学基金(82060668)
云南省地方本科高等学校(部分)基础研究联合专项(2018FH001-005)
云南省地方本科高等学校(部分)基础研究联合专项(2018FH001-095)
昆明学院引进人才科研项目(YJL18013)
昆明学院引进人才科研项目(YJL2211)
云南省大学生创新创业训练计划(202111393010)
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