针对微生物法检测VB12不易操作,结果平行性和重复性差等问题,对国标GB 5413.14-2010的关键步骤进行分析和优化.在乳酸杆菌培养基中加入VB12标准溶液以刺激莱士曼氏乳酸杆菌生长;调整工作菌种的接菌方式,明确加菌量;验证前处理提取缓冲液中偏重亚硫酸钠对菌株的影响并确定用量;用酶标仪替代分光光度计测定结果.结果表明,菌悬液按0.05％的比例加入到测定培养基中混匀分装的方式,操作简便,线性关系好,R2值为0.9995;浓度为0.01 mg/mL偏重亚硫酸钠缓冲液适合大多数样品提取.优化后的方法加标回收率范围是98.6％～113.3％,重复性实验的RSD范围在1.17％～3.09％.微生物法影响因素多,不易掌握,方法优化后结果准确、稳定,可操作性强,可为VB12检测提供优化思路和技术支持.
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