摘要
借助pACYCDuet-1和pET28a双质粒共表达系统,构建携带Agrobacterium radiobacter来源扁桃酸消旋酶(Ar mandelate racemase,ArMR)、Lactobacillus harbinensi来源D-扁桃酸脱氢酶(Lh D-mandelate dehydrogenase,LhDMDH)和Exiguobacterium sibiricum DSM 17290来源L-亮氨酸脱氢酶(Es L-leucine dehydrogenase,EsLeuDH)编码基因的重组大肠杆菌,将其命名为E.coli BL21(DE3)/pACYCDuet-l-EsLeuDH-LhDMDH:pET28a-ArMR.在低温、低浓度诱导剂的诱导下,该重组菌成功表达了具有各自催化活性的3 种重组酶,其发酵液中LhDMDH、EsLeuDH和ArMR的活性分别为195.8、56.2 U/mL和174.5 U/mL.以诱导后的全细胞为催化剂、D,L-扁桃酸为底物,在D,L-扁桃酸初始浓度50 mmol/L、pH9.5的500mmol/LNH4C1-NH3·H2O缓冲液体系下,180r/min、30℃反应48 h后,L-苯甘氨酸得率可达77.48％,其对映体过量值大于99％.本研究具有较大的产业化潜力,为实现L-苯甘氨酸规模化的生物合成奠定了坚实的基础.
基金项目
国家自然科学基金青年科学基金(31900916)
国家自然科学基金面上项目(31870917)
车用生物燃料技术国家重点实验室开放课题(KFKT2018003)
南阳师范学院青年项目(2018QN004)
河南省科研服务平台专项(2016151)
河南省南水北调中线水源区水生态安全创新型科技团队专项(17454)
河南省高校科技创新团队项目(20IRTSTHN024)
河南省高校省级大学生创新创业训练计划项目(S201910481006)
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