摘要
通过研究不同质量浓度(1、5、10、15、20 g/L)亚牛磺酸(hypotaurine,HTU)对南美白对虾多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)活性的影响,判断HTU的抑制类型并测定抑制常数,同时通过测定PPO蛋白的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)、圆二色谱、表面疏水性以及内源荧光光谱研究HTU对PPO构象的影响.结果表明HTU能抑制PPO活性,当其质量浓度为20 g/L时,能抑制79.38％的酶活性,最大半数抑制浓度(half-maximal inhibitory concentration,IC50)为16.09 g/L.Lineweaver-Burk双倒数作图的结果显示Vmax不变,Km增大,推测HTU是竞争性抑制剂的一种,其抑制常数KI为0.445 mmol/L.随着HTU质量浓度的增大,SDS-PAGE结果显示酶蛋白的分子质量未发生明显变化;圆二色谱和表面疏水性的结果表明其α-螺旋与β-折叠向β-转角和无规卷曲发生转变,酶蛋白发生部分去折叠,使得疏水性氨基酸残基暴露,导致蛋白表面疏水性增强;内源荧光光谱结果显示HTU能够使PPO的荧光强度发生猝灭,最大发射波长发生红移.因此推测HTU可能是通过改变PPO的空间结构影响酶的活性.
国家科技期刊平台
NSTL
维普
万方数据