食品科学2021，Vol.42Issue(4) ：319-325.

抗副溶血弧菌OMPK单克隆抗体的制备及其ELISA双抗体夹心检测方法建立

Preparation of Monoclonal Antibodies against Outer Membrane Protein K of Vibrio parahaemolyticus and Development of a Double Antibody Sandwich ELISA

王晓瑞 邱红玲 王寿利 朱海华 周莉 平洋 谭静 王永 王慧
食品科学2021，Vol.42Issue(4) ：319-325.
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抗副溶血弧菌OMPK单克隆抗体的制备及其ELISA双抗体夹心检测方法建立

Preparation of Monoclonal Antibodies against Outer Membrane Protein K of Vibrio parahaemolyticus and Development of a Double Antibody Sandwich ELISA

王晓瑞 1邱红玲 2王寿利 3朱海华 1周莉 1平洋 1谭静 1王永 1王慧4
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作者信息

  • 1. 河南省商业科学研究所有限责任公司,河南郑州 450002
  • 2. 上海交通大学医学院公共卫生学院,上海 200025
  • 3. 中国科学院上海生命科学研究所,上海 200233
  • 4. 河南省商业科学研究所有限责任公司,河南郑州 450002;上海交通大学医学院公共卫生学院,上海 200025
  • 折叠

摘要

制备全长和截短的弧菌外膜蛋白K(outer membrane protein K,OMPK),纯化后的OMPK免疫6～8周雌性BALB/c小鼠,间接夹心酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测小鼠的血清效价,结果表明全长OMPK重组蛋白制备的血清效价是截短OMPK1重组蛋白制备血清效价的128倍.通过全长的OMPK重组蛋白制备多株用于检测副溶血弧菌的单克隆抗体,用生物素(biotin)和辣根过氧化物酶对单克隆抗体进行标记.间接夹心ELISA实验结果表明:只有VP3-biotin和VP16-biotin与其他单克隆抗体配对检测不同的副溶血弧菌菌株表现出较高的灵敏度及良好的特异性,并且在检测其他种属20株菌时无交叉反应.VP16(Fab)-biotin/VP3检测副溶血弧菌时较VP16-biotin/VP3具有更高的灵敏度,该方法用于检测海鲜样品时,VP16-biotin/VP3检测三文鱼(5～10 CFU/25 g)和血蚶样品为副溶血弧菌阳性.本研究开发了一种快速、灵敏、简便的副溶血弧菌间接夹心ELISA检测方法.

关键词

副溶血弧菌/弧菌外膜蛋白K/单克隆抗体/间接夹心ELISA

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基金项目

中国科学院重点项目(ZDRW-ZS-2017-1)

中央引导地方项目(YDZX20204100004126)

河南省级特聘研究员项目(200511003)

出版年

2021
食品科学
北京食品科学研究院

食品科学

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.327
ISSN：1002-6630
被引量4
参考文献量9
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