摘要
目的:探讨榆干离褶伞溶栓酶对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的血管内皮细胞炎性损伤的保护作用.方法:以LPS诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)炎性损伤.将HUVEC分为空白对照组、模型组和榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)低、中、高剂量组.采用噻唑蓝法测定HUVEC存活率,通过酶联免疫吸附测试法检测细胞上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白介素6(interleukin 6,IL-6)、E-选择素和单核细胞趋化因子1(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)水平.流式细胞术检测细胞间黏附分子1 (intercellular cell adhesion molecule 1,ICAM-1)表达水平,采用Hoechst染色法观察HUVEC与人急性单核细胞白血病细胞系(human acute monocytic leukemia cell line-1,THP-1)的黏附作用.用蛋白印迹实验检测HUVEC的Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)以及核因子-KB (nuclear factor κB,NF-κB)通路中主要蛋白(髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、转化生长因子β激活激酶1(transforming growth factor β activated kinase 1,TAK1)、磷酸化TAK1(phosphorylated TAK1,p-TAK1))的表达和活化情况.结果:LUFE能够抑制LPS所诱导的HUVEC培养上清液LDH、TNF-α、IL-6、E-选择素和MCP-1水平的升高,降低细胞ICAM-1表达水平并减弱HUVEC与THP-1的黏附作用.与模型组比较,LUFE各剂量组TLR4、MyD88、p-TAK1/TAK1、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK) /JNK、p-p38/p38、p-NF-κB/NF-κB水平显著降低(P＜0.05).结论:LUFE对血管内皮细胞的炎性损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制TLR4/MyD88/TAK1/NF-κB信号通路及MAPK通路,进而降低炎症因子水平,从而保护血管内皮细胞.
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