摘要
为研究解淀粉芽孢杆菌素Amylocyclicin W5的抑菌机理,本实验通过硫酸铵沉淀、离子交换以及ÄKTA蛋白纯化系统对Amylocyclicin W5进行分离纯化,并对Amylocyclicin W5进行三羟甲基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳;此外,以蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus LMGT2805)为指示菌对Amylocyclicin W5进行抑菌实验,同时通过扫描电子显微镜、透射电子显微镜观察细胞形态变化以及细胞内部结构变化.结果表明,最适宜沉淀细菌素的硫酸铵饱和度为70％,0.5 mol/L NaCl可以明显洗脱吸附在HiPrep SP XL 16/10柱上的Amylocyclicin W5,将洗脱液通过ÄKTA蛋白纯化系统得到2个对应的收集峰(F1和F2);对不同收集峰对应的洗脱液进行抑菌实验,结果发现只有F2对应的组分液对B.cereus LMGT2805有抑菌效果.三羟甲基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示Amylocyclicin W5组分F2的分子质量约为12.3 kDa.高浓度(4倍最低半抑菌浓度)条件下的Amylocyclicin W5可以完全抑制B.cereus LMGT2805,其主要抑菌机制是破坏其细胞壁,使其形成孔洞,导致其内容物外泄,细菌(营养或芽孢细菌)无法正常进行代谢,从而造成细菌的死亡.实验结论为新型广谱细菌素的开发利用及其在食品安全领域的应用研究提供了数据支持.
基金项目
国家自然科学基金青年科学基金(31801663)
上海市自然科学基金(18ZR1449900)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(2016M02)
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