摘要
以牡蛎肉为原料制备二肽基肽酶-IV(dipeptidyl peptidase-IV,DPP-IV,EC 3.4.14.5)抑制肽.通过对比5种蛋白酶(木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶)制备的酶解液对DPP-IV的抑制活性,发现胰酶制备的酶解液对DPP-IV抑制效果最好.通过优化胰酶酶解条件,确定最优酶解条件为加酶量0.8％、pH 8.0、温度37 ℃,酶解时间90 min.酶解液经超滤、Sephadex G-15和高效液相色谱分离纯化,获得肽片段.通过质谱鉴定筛选得到2种肽段的序列为Glu-Ile-Thr-Ala-Leu-Ala-Pro-Ser-Thr-Met-Lys(EITALAPSTMK)和Ile-Leu-Ala-Pro-Pro-Glu-Arg(ILAPPER).利用BIOPEP在线模拟分析了这2个肽的胃肠液消化特性.采用固相合成法合成肽段APSTM和ILAPPER,并应用于DPP-IV抑制活性研究.结果显示,2个肽段的IC50值分别为354.81μmol/L和16.98μmol/L.分子对接结果表明,抑制肽与DPP-IV的活性部位主要以氢键、范德华力和π键相互作用为主.本研究通过酶解牡蛎肉制备高抑制活性的DPP-IV抑制肽,为以牡蛎为原料的功能性食品开发利用提供了理论基础.
基金项目
"十三五"国家重点研发计划重点专项(2018YFD0901004)
财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系资助项目(CARS-49)
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