摘要
建立一种新型的单核细胞增生李斯特氏菌检测方法,即通过可视化跨越式滚环等温扩增(saltatory rolling circle amplification,SRCA)技术检测单核细胞增生李斯特氏菌.根据单核细胞增生李斯特氏菌hlyA基因序列设计引物,进行特异性验证,对灵敏度和人工污染样品的检出限进行测定.通过检测70种实际食品样品对SRCA方法的敏感性、特异性和符合率进行评价.结果 表明:所有单核细胞增生李斯特氏菌呈阳性结果,非单核细胞增生李斯特氏菌呈阴性结果,说明该方法特异性良好.SRCA方法的灵敏度为8.9×100 fg/μL,是传统聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法的l 000倍,检出限为2.8×100 CFU/g,是传统PCR方法的1/1000.在实际样品的检测中,SRCA方法与GB 4789.30-2016《食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌》方法进行比较,其敏感性、特异性和符合率分别为100％、97.01％和97.14％.可视化SRCA技术具有操作简便、设备简单、特异性强、灵敏度高、检出限低、检测成本低等优点,适合在基层单位和中小型食品企业中推广应用.
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